【檢驗(yàn)原理】
木瓜源性成分(Papaya)熒光定量PCR試劑盒可用于檢測食品或其他材料中是否有木瓜的成分?，F(xiàn)代食品加工工藝極大改變了食材原有的味道、氣味、色澤、紋理和質(zhì)地等特性，因此傳統(tǒng)的感官鑒別技術(shù)已經(jīng)無法對食材的真?zhèn)芜M(jìn)行準(zhǔn)確的鑒定。同時部分食材還有致敏性，因此基于基因檢測的快速靈敏的食材來源檢測技術(shù)將對食品監(jiān)管和安全提供重要的保障。? ??
【儲存條件及有效期】
-20℃±5℃，避光保存、運(yùn)輸、反復(fù)凍融少于 7 次，有效期 12 個月。
【適用儀器】
ABI 、安捷倫 MX3000P/3005P、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。
1.1 結(jié)果判斷
陽性：檢測通道 Ct 值≤35.0，且曲線有明顯的指數(shù)增長曲線。
可疑：檢測通道 Ct 值>35.0，且出現(xiàn)典型擴(kuò)增曲線的樣本建議重復(fù)試驗(yàn)，重復(fù)試驗(yàn)結(jié)果出現(xiàn) Ct 值≤35.0 和典型擴(kuò)增曲線者為陽性，否則為陰性。
陰性：樣本檢測結(jié)果無 Ct 值且無明顯的擴(kuò)增曲線。
2. 檢測方法的局限性
a. 樣本檢測結(jié)果與樣本收集、處理、運(yùn)送以及保存質(zhì)量有關(guān)；
c. 陽性對照、擴(kuò)增產(chǎn)物泄漏，會導(dǎo)致假陽性結(jié)果；
f. 試劑運(yùn)輸，保存不當(dāng)或試劑配制不準(zhǔn)確引起的試劑檢測效能下降，出現(xiàn)假陰性或定量檢測不準(zhǔn)確的結(jié)果；
g. 本檢測結(jié)果僅供參考，如須確診請結(jié)合臨床癥狀以及其他檢測手段。
1.1 DNA 提取
1) 對上述處理好的標(biāo)本加入等體積核酸提取液(固體標(biāo)本加入50μL 核酸提取液)， 100℃恒溫處理 10min，13,000 rpm 離心 5min，取上清液轉(zhuǎn)移至新的 1.5mL EP 管，-20℃保存；
2) DNA 的提取也可以采用上海晅科生物科技有限公司生產(chǎn)的DNA 提取試劑盒(離心柱提取法)，請嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行操作。
在使用熒光PCR試劑盒過程中，需要注意以下幾個方面：
1. 保持實(shí)驗(yàn)室潔凈，避免外界雜質(zhì)的污染影響結(jié)果。
2. 在進(jìn)行樣品轉(zhuǎn)移和控制組合過程中，要避免交叉污染，盡量避免手工錯誤和環(huán)境影響。
3. 正確設(shè)置PCR反應(yīng)條件：在設(shè)置PCR反應(yīng)條件時，要根據(jù)樣品類型和PCR所需片段大小等因素來確定條件，并且確保反應(yīng)溫度和時間都是正確的。
4. 嚴(yán)格遵守操作規(guī)程，遵循實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序，以確保實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)確、可靠。
5. 在熒光PCR實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)處理中，應(yīng)堅(jiān)持嚴(yán)格的數(shù)據(jù)分析流程，并詹析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。
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